جداسازی و شناسایی باکتری ترشح کننده ی پروتئاز خارج سلولی با قابلیت عملکرد در شرایط اسیدی

در پژوهش حاضر، جداسازی یک باکتری با قابلیت رشد در شرایط اسیدی و توانایی تولید پروتئاز خارج سلولی مد نظر بود. جستجوی باکتری با نمونه گیری از خاک و آب مناطق دارای ph اسیدی انجام گرفت و بر اساس ویژگی های ظاهری و آنالیز توالی srrna16سویه f1390 به عنوان بهترین سویه ترشح کننده آنزیم انتخاب و در جنس serratia طبقه بندی گردید. بهینه سازی شرایط کشت نشان داد که باکتری مورد نظر در محیط tsb با 5/5 ph~ و دمای oc30 و شرایط هوادهیrpm 180 بالاترین میزان تولید پروتئاز را دارد. آنزیم ترشح شده بوسیله تلفیقی از روشهای رسوب دهی با آمونیوم سولفات و ستون کروماتوگرافی تعویض یونی sp-sepharoseو ژل فیلتراسیون sephacryl s-200 خالص گردید. به کمکsds-page وزن مولکولی ظاهری آنزیم حدود kda50 تخمین زده شد. این آنزیم یک پروتئاز ساکروفیل با بهینه دما فعالیت بینoc 35-30 و پایداری دمایی پایین می باشد که در مدت 30 دقیقه انکوبه شدن در دمای 50 درجه سانتیگراد 76% فعالیتش را از دست می دهد. آنزیم دارای خصوصیت اسیدی بوده و ph بهینه آن 4 می باشد. kmو vmax این آنزیم به ترتیب mg/ml 8/5 ، u 1338/ 0 می باشد. این پروتئاز به شدت توسط edta مهار می شود و به همین دلیل به عنوان یک متالوپروتئاز طبقه بندی گردید. از آن جایی که 1و10 فنانترولین اثری بر روی فعالیت پروتئولیتیک آنزیم نشان نداد، می توان گفت که آنزیم به فلز روی برای فعالیت خود وابسته نیست. در مجموع، بر اساس ویژگیهای این پروتئاز از جمله دارا بودن بهینه فعالیت درph اسیدی و ساکروفیل بودن آن، می توان این آنزیم را به عنوان یک آنزیم با خصوصیات منحصر به فرد برای کاربرد در صنایع مختلف به خصوص صنایع لبنی معرفی نمود.